无菌室的建设

无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。可以用板材和玻璃建造。面积不宜过大，约 4 — 5 平方米即可，高 2.5米左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。

无菌室标准化规程与验收规范。

1.目的

　　本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护一个标准化规程。

2.适用范围

　　生测实验室

3.责任者

　　QC主管生测员

4.定义

　　无

5.安全注意事项

　　严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。

6.规程

　　6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。净台洁净度应达到100级。

　　6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

　　6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

　　6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。

　　6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

　　6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

　　6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换工作服，鞋，帽子，口罩和手套（或用70%的乙醇再次擦拭双手），方可进入无菌室进行操作。

　　6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。

　　6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。

　　6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

　　6 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

　　6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

　　6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。

　　6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。

　　6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水下冲洗，严禁污染下水道。

　　6.16.无菌室应每月检查菌落数。在净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得过1个菌落，10000级洁净室平均不得过3个菌落。如过限度，应对无菌室进行消毒，直至重复检查合乎要求为止。